原位雜交原理：原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。

　　原位雜交(FISH雙標)可以檢測兩個靶基因的共定位情況。

實驗結果展示：

實驗流程：

　　細胞爬片熒光探針原位雜交雙標實驗步驟

　　1、細胞爬片固定：細胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

　　2、消化：基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。.

　　3、預雜交：滴加預雜交液37°恒溫箱1h。

　　4、雜交：傾去預雜交液，滴加含探針1雜交液，37度雜交過夜。

　　5、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌

　　6、雜交：傾去預雜交液，滴加含探針2雜交液，37度雜交過夜。

　　7、DAPI復染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

　　8、鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光。)

送樣運輸要求：

　　冰切：標本放原位雜交固定液中，常溫運輸;冰凍切片-20°運輸。

　　石蠟：標本放原位雜交固定液中，常溫運輸;石蠟切片常溫運輸。

　　細胞爬片：細胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，密封，4度運輸。共聚焦皿

　　新鮮組織：組織取出后可以立即冷凍處理，后干冰運輸?shù)轿錆h進行后續(xù)冰凍切片處理。新鮮組織-80°保存。